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  很多人想知道環(huán)境中微生物的檢測和分離純化，今天微生物檢測中心就為大家分享，供大家參考。

    一、實驗目的

    1、熟悉常用微生物培養(yǎng)基的配制方法。

    2、學習并掌握各種無菌操作技術，并用此技術進行微生物稀釋分離、劃線分離接種。

    3、用平板劃線法和稀釋法分離微生物。

    4、認識微生物存在的普遍性，體會無菌操作的重要性。

    二、實驗原理

    1、微生物的分離與純化

    土壤是微生物生活的大本營，在這里生活的微生物無論是數(shù)量還是種類都是極其豐富的。因此，土壤是微生物多樣性的重要插所，也是發(fā)掘微生物資源的重要基地，可以從土壤中分離、純化得到許多有價值的菌株。

    從混雜的微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過程稱為微生物的分離與純化。常用的是平板分離法。為了獲得某種微生物的純培養(yǎng)，一般是根據(jù)該微生物對雪養(yǎng)、酸堿度、濃度和氧等條件要求不同，而供給它適宜的培養(yǎng)條件，或加入某些抑制劑抑制其他菌生長而利于此菌生長的環(huán)境，從而淘汰其他一些不需要的微生物。再用稀釋涂布平板法或稀釋后平板劃線分離，純化該微生物，直至得到純菌株。

    2、平板菌落計數(shù)法

    平板菌落計數(shù)法是將待測樣品經(jīng)適當稀釋，使其中的微生物充分分散成單個細胞，取一定量的稀釋樣液接種到平板上，經(jīng)過培養(yǎng)，由每個單細胞生長繁殖而形成肉眼可見的菌落，即一個單菌落應代表原樣品中的一個單細胞。統(tǒng)計菌落數(shù)，根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種量即可換算出樣品含菌數(shù)。

    平板菌落計數(shù)法雖然操作繁瑣，結(jié)果需要培養(yǎng)一段時間才能取得，而且測定結(jié)果易受多種因素的影響，但是，由于該計數(shù)方法的最大優(yōu)點是可以獲得活菌的信息，所以被廣泛用于生物制品檢驗（如活菌制劑），以及食品、飲料和水（包括水源水）等的含菌指數(shù)或污染程度的檢測。

    三、實驗材料

    土樣10g,未知菌變形桿菌單菌落平板和無菌水。取液器（5m1、l000ml各一支），培養(yǎng)箱，培養(yǎng)皿（20個），無菌有帽試管，三角瓶，無菌涂棒，接種環(huán)，5ml、1ml無菌吸頭（移液管），記號筆，酒精燈，火柴，試管架，牙簽。

    四、實驗步驟

    （一）培養(yǎng)基的制備（提前準備）

    按以下步驟制備牛肉膏蛋白胨平板培養(yǎng)基，每組20個平板。

    1、培養(yǎng)基的制備原則：適當?shù)臓I養(yǎng)成分；合適的酸堿度，配制后經(jīng)滅菌手續(xù)方可使用。

    2、培養(yǎng)基配制的基本程序：稱量一溶化一測定及矯正pH一過濾一分裝-滅菌備用（若配制固體平板培養(yǎng)基，則先滅菌后再傾倒平板備用）。

    3、培養(yǎng)基制備過程

    （1）稱量：按配方及配制的總量計算各種成分所需的量分別稱取。

    （2）溶解：將各種成分放入三角瓶（三角瓶體積要大于所裝培養(yǎng)基體積2倍為宜）中，加自來水（一般配完全培養(yǎng)基用）或蒸餾水至所配培養(yǎng)基的總量，在微波爐中加熱溶解，觀察液體沸騰情況，在液體溢出之前，馬上斷開電源，反復多次，直到完全溶解。

    （3）調(diào)pH值：初溶解好的培養(yǎng)基pH可能不符合要求，需用lmol/L NaOH或lmol/LHCI調(diào)pH至所需范圍，

    （4）過濾：趁熱用濾紙或多層紗布過濾，以利于結(jié)果觀察。一般無特殊要求的情況下，這一步可以省去（本實驗無需過濾）。

    （5）分裝：按實驗要求，可將配制的培養(yǎng)基分裝入試管或三角瓶內(nèi)。

    微生物檢測中心跟大家分享以上內(nèi)容，希望可以幫助到大家。